Resistência da Candida glabrata a diferentes concentrações de antifúngico

Abstract

Candida glabrata é um fungo virulento e patogénico que nos últimos anos se tem tornado um importante organismo patogénico e responsável por uma elevada taxa de mortalidade. Os problemas associados a esta espécie são a sua resistência aos agentes antifúngicos, bem como a sua capacidade de formar biofilmes, que aumentam a virulência e versatilidade na adaptação a diferentes habitats. Assim, torna-se muito importante o estudo dos biofilmes de C. glabrata, bem como da sua resistência. O primeiro objectivo deste trabalho foi estudar a susceptibilidade de biofilmes de C. glabrata (2 isolados clínicos – 534784, 562123 - e uma referência – ATCC 2001) a diferentes concentrações de anfotericina B. A avaliação das células viáveis (obtida pela determinação do número de unidades formadores de colónias) do biofilme mostrou que a estirpe mais resistente ao antifúngico é C. glabrata ATCC 2001, seguindo-se C. glabrata 534784 e, por último, C. glabrata 562123. A quantificação da biomassa total (por coloração com violeta cristal) demonstrou que a estirpe com maior produção de biomassa é C. glabrata 562123, mas no entanto os biofilmes desta estirpe são os mais susceptíveis à anfotericina B. O outro objectivo do trabalho aqui apresentado foi o estudo da expressão de genes de resistência de C. glabrata na presença de anfotericina B (como controlo foram realizados ensaios sem agente antifúngico). Para tal foi estudada a expressão dos genes ERG3, ERG6 e ERG11, envolvidos na biossíntese de ergosterol, para as 3 estirpes de C. glabrata na forma planctónica e de biofilme. Após as análises foi possível verificar que a presença do antifúngico leva a que os três genes, em determinadas concentrações e para determinadas estirpes, sejam sobrexpressos. Em suma, este trabalho demonstra que os biofilmes de C. glabrata são susceptíveis à anfotericina B, dependendo da concentração e da estirpe estudada. Além disso, mostrou que na presença do antifúngico, a expressão dos genes é alterada.

Candida glabrata is a virulent and pathogenic fungus that, in the recent years, has been an important pathogenic organism and is responsible for a high mortality rate. The problems associated to these species consist in a high resistance to antifungal agents and its ability to form biofilm, becoming highly virulent and flexible to the adaption to different habitats. So, the study of C. glabrata biofilm formation and its antifungal resistance is of major importance. The study of the susceptibility of C. glabrata (2 clinical isolates and 1 reference strains) to different concentrations of amphotericin B was the first goal of this research. The viable cells (determined by enumeration of the colony forming units) of biofilm showed that the more resistant strain to the antifungal is C. glabrata ATCC 2001 and the less is C. glabrata 562123. The total biomass quantification (by crystal violet staining) demonstrated that the strain with more ability to form biofilm is C. glabrata 562123, but it is more susceptible to amphotericin B. This work also evaluated the gene expression profile of C. glabrata in absence and presence of amphotericin B. So the expression of the genes ERG3, ERG6 and ERG11, which are involved in the biosynthesis pathway of ergosterol, was studied. After the analyses it was possible to verify that the antifungal agent presence leads to the overexpression of the three genes, but it was concentration and strain dependent. In summary, C. glabrata is susceptible to amphotericin B, depending on the strain and concentration of the antifungal agent. Moreover, genes expression changed in the presence of amphotericin B.