Avaliação da produção de lacase pela indução de íons cobre e detecção do gene em duas linhagens de ascomicetos isolados de esponjas marinhas

Abstract

Lacases produzidas por fungos derivados de amostras marinhas são consideradas biotecnologicamente promissores, pois podem representar enzimas diferentes das produzidas por seus parceiros terrestres e possuem potencial aplicação biotecnológica em ambientes ou processos salinos. O objetivo do presente trabalho fui avaliar o efeito indutivo de íons cobre na síntese da enzima lacase por duas linhagens: Nigrospora sp. (02) e Arthopyrenia sa/icis (D4) isoladas da esponja marinha Dragmacidon reticulata, bem como detectar as isoformas desta enzima através de técnicas moleculares. As amostras foram fermentadas em frascos contendo 100 m1 do meio MA2 + 3% de NaCI, incubadas à 28 oCa 150 rpm por 7 dias, filtmdas a vácuo e mantidas em estufu a I 05 °C por 8 homs. A atividade da lacase fui determinada através da oxidação de seringaldazina (525 nm). Uma unidade de atividade enzimática foi definida pela altemção da abso!bância em 0.01 por minuto. Os respectivos DNA genômicos foram extraídos, amplificados com os primers degenemdos LAC3!7LAC3r, purificados, clonados em E. co/i JM109 e sequenciados. As sequências obtidas fomm montadas em um contig e comparadas com sequências do Genbank (Blastx). Na concentração de 5 mM de íons CuS04, foi observada uma elevação dos níveis enzimáticos e em concentrações acima de 5 mM, houve um redução na produção da enzima. No 5° dia de fermentação, Nigrospora sp. (02) apresentou um valor máximo de lacase (25.2 U L-I) que fui 3.9 vezes superior ao valor obtido com o controle. Nas concentrações de 1mM e lO mM de CuS04 houve um aumento de 2.6 e 3.0 vezes em relação ao controle, respectivamente. Em adição, a produção desta enzima pelo fungo Nigrospora sp. (02) fui 2.8 vezes superior a produção obtida comA. salicis (D4). Uma isoforma da enzima fui identificada a partir da amostra de Nigrospora sp. (02) e três isoformas a partir da amostra A. salicis (D4 ), as quais apresentaram similaridade de sequência entre 45 e 100% com lacase de um ascomiceto marinho Clavariopsis aquatica. Os resultados derivados do presente trabalho estimulam estudos subsequentes de otimização e caracterização das lacases produzidas pelos dois fungos ascomicetos recuperados de ambiente marinho.