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https://hdl.handle.net/1822/34475
Título: | Vírus herpes-γ e polimorfismos dos sistemas de processamento antigénico : importância na oncogénese e no prognóstico dos linfomas de células B |
Outro(s) título(s): | Herpesvirus γ and polymorphisms of antigen processing systems : oncogenic and prognostic role on B-cells Lymphomas |
Autor(es): | Marques, Herlander |
Orientador(es): | Longatto Filho, Adhemar Medeiros, Rui |
Data: | 24-Mar-2014 |
Resumo(s): | Os vírus Herpes-γ caracterizam-se pelas suas capacidades oncogénicas. O vírus de Epstein-Barr
(EBV) coloniza grande parte da população mundial e, tal como o vírus Herpes Humano tipo-8
(HHV8), está associado a doenças linfoproliferativas. O grupo heterogéneo dos Linfomas constitui
uma das neoplasias de mais rápido crescimento nos países desenvolvidos, em parte devido ao
aumento de imunodeficiência associada à SIDA, aos transplantes e ao envelhecimento.
Apesar da descrição total do genoma humano, tem-se verificado que muita da complexidade
biológica resulta de variações genéticas individuais ou polimorfismos. Destes, os mais frequentes
são os polimorfismos de nucleótido único ou SNPs (Single Nuleotide Polymorphisms). Vários
SNPs foram associados ao risco de Linfoma não-Hodgkin (LNH) em genes de múltiplas proteínas
intracelulares, mas não nos sistemas de processamento antigénico.
Esta tese estuda a possibilidade dos vírus Herpes-γ se associarem ao risco ou ao prognóstico dos
LNH de células B diferenciadas (LNH-B); procura também relacionar a presença do EBV com
alguns polimorfismos dos sistemas de processamento antigénico, assim como o valor etiológico e
prognóstico destes últimos nos LNH-B. Com estes objectivos foram incluídos 281 doentes com
LNH-B de alto grau e de baixo grau. O grupo controlo foi constituído por amostras de dadores de
sangue anónimos e de voluntários saudáveis. As amostras dos doentes que deram o consentimento
informado foram usadas para a pesquisa do EBV, do HHV8 e de 54 SNPs.
Na detecção do EBV e do HHV8 foram usadas sondas para os genes da polimerase vírica (BALF5)
e da ciclina-v (ORF-72), prospectivamente. A quantificação da carga vírica foi feita por PCR em
tempo real, com sondas fluorescentes. Para os SNPs foram identificadas sequências obtidas de
bases de dados públicas e, seguidamente, foram desenhadas as sondas com as sequências
homólogas correspondentes. A necessidade de selecção de SNPs das regiões promotoras originou o
desenvolvimento de uma nova metodologia. Esta baseou-se na possibilidade das alterações
transcripcionais induzidas pelos SNPs nos locais de ligação dos Factores de Transcrição (FT)
poderem ser parcialmente previstas por métodos computacionais com o PromoterTESS. A
genotipagem dos SNPs foi realizada com técnica sequencial de PCR e espectrometria de massa por
tempo de voo, após dessorção/ionização a laser em matriz de suporte (MALDI-TOF). Os resultados obtidos revelaram uma significativa associação do EBV à totalidade dos LNH-B,
assim como aos seus subgrupos de alto e baixo grau. A frequência do EBV nos doentes foi de
18,9%, significativamente mais alta que os 6,6% do grupo controlo (p=0,000). O risco global foi de
3,2, sendo maior para os linfomas de alto grau (4,5) do que para os linfomas de baixo grau (2,8). A
carga vírica do EBV não foi significativamente diferente entre o grupo dos doentes (4973 c/ml) e o
grupo controlo (178 c/ml). No entanto, os 4 doentes com HIV apresentavam uma carga vírica
(92.340 c/ml) superior à do controlo (p=0,019) e aos doentes sem SIDA (p=0,023).
Nos LNH-AG o EBV estava presente em 23,2% dos doentes e não se relacionava com qualquer
parâmetro clínico ou analítico As taxas de resposta foram semelhantes em ambos os grupos, EBV+
ou EBV-, com 93,2 e 88,9%, respectivamente. Também não foi diferente a sobrevivência aos 5
anos, de 64 e 74%, respectivamente. Nos doentes EBV+ verificou-se uma tendência (p=0,058) para
pior sobrevivência no grupo tratado com CHOP, comparativamente ao grupo tratado com RCHOP,
o que sugere a eficácia do Rituximab nestes doentes.
Clinicamente, nos LNH-BG distinguiu-se o Linfoma de Células do Manto (LCM), com maior
prevalência de homens, com características clínicas mais avançadas e pior prognóstico, com 82,4%
de progressão ou morte (tempo de observação mediano de 4,5 anos). O EVB foi identificado em
14,4% dos doentes com LNH-BG, o que foi estatisticamente superior ao grupo controlo. O valor
prognóstico do EBV só se revelou significativo nos LCM, traduzindo-se por pior resposta
terapêutica e pior sobrevivência.
Só foram estudados nesta tese 7 SNPs, dos 54 realizados. Localizam-se nas regiões codificantes
dos genes dos Transportadores Associados ao Processamento Antigénico (TAP) 1 e 2, no locus
3.21 do cromossoma 6 e correspondem aos códigos rs4148879 e rs4148882 do TAP1 e
rs17583244, rs2228396, rs9380326, rs10484565 e rs3819721 do TAP2.
O estudo de risco para LNH-B (caso controlo) mostrou-se significativo para os 2 SNPs do TAP1. O
SNP rs4148882 reduz o risco e o rs4148879 aumenta-o. Esta associação de riscos permaneceu
válida para a análise separada dos LNH-AG e LNH-BG.
Verificou-se a associação de alguns SNPs do TAP2 a uma maior prevalência de EBV nos doentes e
controlos. Os alelos variantes dos SNPs rs17583244 e rs9380326 associaram-se à presença do
EBV, o primeiro, na totalidade dos casos e o segundo, apenas nos doentes.
Na análise de sobrevivência, o SNP rs10484565 conferiu mau prognóstico na globalidade dos
LNH-B e nos subgrupos de alto e de baixo grau (neste último sem atingir significância). The Epstein-Barr Virus (EBV) colonizes much of the world population and is associated with numerous lymphoproliferative disorders. Along with the Human Herpes type-8, they belong to the Herpes γ virus family, known by their oncogenicity. Lymphomas are a heterogeneous neoplasia, fast growing in developed countries, and are associated with immunodeficiency due to AIDS, transplant immunosuppression and aging. Much of their biologic complexity results from individual genetic variations or polymorphisms. The most frequent of these are Single Nucleotide Polymorphisms (SNPs). Several SNPs belonging to different signaling pathways, cytokines and enzymatic systems were related to the risk of non- Hodgkin Lymphoma (NHL), but until now, SNPs of processing and antigen presentation systems have not been studied. The goal of this thesis is: to clarify the relationship between Herpes-γ virus and risk and prognosis of mature B cell non-Hodgkin lymphomas (NHL-B), to relate the presence of EBV to polymorphisms of the antigen processing and presentation systems, and to discover the etiologic and prognostic value of these polymorphisms. To address these questions, 281 patients with NHLB both high and low grade (HG and LG) were studied. Healthy volunteer blood donors were used as controls and screened for EBV, HHV8 and 54 SNPs of processing and antigen presentation systems. For EBV and HHV8 detection, probes directed to genes of the viral polymerase (BALF5) and vcyclin (ORF-72) were used, respectively. Viral load was quantified with real time PCR and fluorescent probes. For SNPs, sequences were obtained from public data bases and probes designed for homologous sequences. The need to select SNPs for promoting regions required the development of a new method. This was based on the capacity to predict transcriptional changes induced by SNPs on Transcription Factors Binding Regions (TFBR) using a computer program called PromoterTESS. SNP genotyping was done by sequential PCR and mass spectrometry (MS) after laser desorption in a matrix support (MALDI-TOF). Results showed a significant association between EBV and NHL-B, both as a whole as well as its high and low grades subgroups. EBV-patients were significantly more frequent than EBV-controls, 18.9 versus 6.6%, (p=0.0000). The global risk was 3.2, being greater for high grade NHL (4.5) than low grade NHL (2.8). EBV viral load was not significantly different between patients (4973 c/ml) and controls (178 c/ml). However, the 4 HIV patients had a higher viral load (92.340 c/ml) compared with controls (p=0.019) or non-HIV patients (p=0.023). In high grade NHL, EBV was present in 23.2% of the patients and was independent of any clinical or laboratorial parameter. Therapeutic response rates were similar in EBV+ and EBV- groups, 93.2 and 88.9%, respectively. The 5 year survival rate was also identical, 64 and 74%, respectively. In EBV+ patients there was a trend towards lower survival (p=0.058) in the group treated with CHOP, when compared with the R-CHOP treated group, suggesting an effect of Rituximab in these patients. Mantle cell lymphoma (MCL) was more frequent in men, had worse clinical symptoms and prognosis, 82.4% of the patients progressed or died in a median follow up of 4.5 years. EBV was identified in 14.4% of patients with low grade NHL, which was higher than controls. The EBV prognostic value was only significant in MCL, showing worse therapeutic response and worse survival rates. Of all the 54 SNPs evaluated, 7 were studied. These SNPs are located in the coding regions of the Transporter Associated with Antigen Processing (TAP) 1 and 2 in the 3.21 locus of chromosome 6, corresponding to the codes rs4148879 and rs4148882 for TAP1 and rs17583244, rs2228396, rs9380326, rs10484565 and rs3819721 for TAP2. The case-control study for NHL proved significant for both TAP1 SNPs. SNP rs4148882 is associated with a reduced risk, while SNP rs4148879 is associated with an increased risk. This risk association was also true in a separate analysis of the high and low grade NHL. None of the TAP2 SNPs were associated with NHL risk. There was, however, an association of some of the TAP2 SNPs to a higher EBV prevalence both in patients and controls. The variant alleles in SNPs rs17583244 and rs9380326 were associated to EBV, the first in all participants, the second only in patients. Regarding survival rates, it was found that the SNP rs10484565 variant allele implies a negative prognostic. |
Tipo: | Tese de doutoramento |
Descrição: | Tese de doutoramento em Medicina |
URI: | https://hdl.handle.net/1822/34475 |
Acesso: | Acesso restrito UMinho |
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Herlander José de Resende Marques.pdf Acesso restrito! | 4,44 MB | Adobe PDF | Ver/Abrir | |
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