Liquid-liquid equilibrium and partitioning features of bovine trypsin in Ucon 50 HB5100 /sodium citrate aqueous two phase systems

Abstract

The phase diagrams of Ucon 50-HB-5100, a non-ionic random copolymer of ethylene oxide and propylene oxide (EOPO) and sodium citrate aqueous two-phase systems were determined at different pHs (5.20 and 8.20) and temperatures (5, 20 and 40º C). The binodal curves were determined by refractive index and enzymatic assay of the solution and described using a four-parameter sigmoidal equation, the reliability of the measured tie line compositions was ascertained by correlation equations given by Othmer Tobias and Bancroft. The two-phase area was expanded by increasing both pH and temperature. The partitioning of bovine trypsin and a-chymotrypsin, proteases of similar physico-chemical properties was investigated in order to evaluate the applicability of partitioning as a putative method to isolate from pancreas and to obtain any information about their partitioning mechanism. The effect of different factors such as pH, tie line length and the presence of an inorganic salt on the protein partition coefficient were analyzed.

Se caracterizaron las curvas binomiales correspondientes a los sistemas bifásicos acuosos formados por Ucon 50-HB-5100, un copolímero al azar de óxido de etileno y óxido de propileno (EOPO) y citrato de sodio a diferentes pHs (5,20 y 8,20) y temperaturas (5, 20 y 40º C). Las curvas binomiales se obtuvieron por determinación del índice de refracción y ensayos enzimáticos de las soluciones correspondientes; las composiciones de las líneas de unión se corroboraron por las ecuaciones propuestas por Othmer Tobias y Bancroft. El aumento del pH y la temperatura condujeron a un aumento del área bifásica. También se ensayó el comportamiento de reparto de dos proteasas tripsina y α-quimotripsina con el objetivo de emplear los principios de partición como método de aislamiento y purificación de Tripsina a partir de páncreas bovino y de obtener información acerca del mecanismo de partición de la misma. Se analizó el efecto del pH, longitud de la línea de unión y presencia de sales inorgánicas sobre el coeficiente de partición de las enzimas.