Uso de técnicas de detecção rápida de fungos filamentosos na água

Abstract

Na Carta Europeia da Água do Conselho da Europa, proclamada em Estrasburgo em 6 de Maio de 1968, encontra-se o seguinte item: “A investigação sobre a água, e especialmente sobre a água já utilizada, deve ser encorajada ao máximo. Os meios de informação devem ser ampliados e as trocas internacionais facilitadas, ao mesmo tempo que se impõe uma formação técnica e biológica de pessoal qualificado para as diferentes disciplinas que interessam.” Passados quase 40 anos e com o presente trabalho procurou-se acrescentar algo à investigação sobre a água, a qual foi o principal objecto desta dissertação. As águas para consumo humano estão sujeitas a um apertado controlo de qualidade microbiológico. Esse controlo focaliza-se essencialmente nas análises bacteriológicas deixando a descoberto o controlo micológico. Os fungos sendo ubíquos, estão também presentes nestes sistemas ecológicos. Contudo, o conhecimento do seu papel ecológico bem como os métodos para a sua detecção, enumeração e isolamento não estão implementados, nem tão pouco regulamentados. No presente trabalho o principal objectivo foi adaptar ou mesmo implementar novos métodos para a detecção, enumeração e isolamento de fungos filamentosos presentes na água. Para alcançar os objectivos inicialmente propostos partiu-se da análise de amostras de água engarrafada. A preocupação de tornar as práticas micológicas simples e acessíveis esteve presente durante o decorrer de todo o trabalho. Neste contexto adaptou-se um meio de cultura (NGRBA – Neopeptona Glucose Rosa de Bengala Agar) alterando-o quer na composição da fonte de carbono e de azoto, quer adicionando sais de tetrazólio (MTT, TTC e CTC). O uso de fluorocromos foi outra técnica utilizada para a detecção da presença de fungos filamentosos na água. Os fungos filamentosos presentes na água em maior número pertencem aos géneros Penicillium (58%), Cladosporium (27%) e Trichoderma (6%). Por sua vez dentro do género Penicillium as três espécies mais representativas são: P. brevicompactum (33%), P. glabrum (23%) e P. chrysogenum (12%). O meio NGRBA é um meio apropriado para enumerar e isolar fungos filamentosos. A sua composição pode ser alterada nas fontes de carbono e azoto tornando-o economicamente mais atractivo sem alterar as suas propriedades. Pode-se ainda encurtar o tempo de detecção / enumeração de fungos filamentosos pela adição do sal de tetrazólio MTT. O uso de técnicas fluorescentes revelou-se uma ferramenta rápida e eficaz para a detecção de fungos em amostras de água. No entanto, a sua implementação requer um investimento avultado e formação técnica específica por parte do operador.

The Water European Charter, approved in Strasbourg in 6th of May 1968, the following item is proclaimed: "the research about water, and in particular wastewater, must be encouraged. The information must be extended and the international exchanges facilitated, at the same time must be imposed a biological technique training of qualified staff." Passed almost 40 years, this item remain actual and the main aim of this work is to contribute for water research. The water for human consumption is required to pass throughout a high microbiological quality control. This control is focused essentially in the bacteriological analyses leaving mycological control out. The fungi are present all around places, so they are also present in water ecological systems. However, the knowledge of the ecological role of fungi as well as their methods for its detection, enumeration and isolation are not yet implemented, nor regulated. In the present work the main aim was adapt or even implement new methods for detection, enumeration and isolation of filamentous fungi present in the water. Initially only the analyses of bottled water samples were considered. To achieve our aim the simplicity of mycological procedures established was our main concern. Taking this into account the medium NGRBA (Neopeptone Glucose Rose Bengal Agar) was adapted and modified in its composition: the carbon and nitrogen sources were changed and it was also added tetrazolium salts like MTT, TTC and CTC. The use of fluorocroms it was used as another technique to detect the presence of filamentous fungi in the water. The filamentous fungi were presented in water in high number which belongs to the genera Penicillium (58%), Cladosporium (27%) and Trichoderma (6%). In the Penicillium taxon the three more representative species were: P. brevicompactum (33%), P. glabrum (23%) and P. chrysogenum (12%). The NGRBA medium was the most appropriate one for enumeration and isolation filamentous fungi. Its composition could be modified in order to make it more economic. The time consumption for detection and enumeration could be shortened with the addition of tetrazolium salt MTT to the NGRBA medium. The use of fluorescent techniques have shown be a fast and efficient tool for the detection of fungi in water samples. Notwithstanding, its implementation requires a high capital investment and a very well trained staff.