Contribuição para o desenvolvimento de um método analítico para HPLC

Abstract

O objetivo deste trabalho consistiu em verificar se era possível estudar um método analítico de OMC IPC (Omadaciclina in-Process – amostras de acompanhamento da síntese de omadaciclina) recorrendo à FMA como solvente na análise de amostras de pós de 1040. Foi também realizada uma comparação entre os métodos analíticos de OMC IPC em que as amostras eram diluídas em FMA (Fase móvel A) ou água. No caso do método de 1040, comparou-se o método original de 1040 e o método de 1040 em que à FMA foi adicionada 0,01% de TEA (trietilamina) na análise de pós de 1040 por forma a averiguar se o fator condições de conservação das amostras e o fator método eram significativos nas %pc (%pureza cromatográfica) dos picos principais. Primeiramente, foram realizadas análises de repetibilidade de amostras de pó de 1040 nos sistemas cromatográficos HPLC Waters Aquirity Arc e HPLC Waters Alliance por forma a verificar se era possível a reprodução do método de OMC IPC nestes sistemas cromatográficos. Constatou-se que não foi possível a pré-validação do método devido ao aparecimento de um pico desconhecido no cromatograma obtido por HPLC Waters Alliance no tempo de retenção de 3,71 minutos sendo. Este fenómeno não foi observado no sistema cromatográfico HPLC Waters Aquirity Arc. Perante a comparação entre os métodos analíticos mencionados constatou-se que o fator amostra foi significativo nas percentagens das áreas para todos os picos principais com exceção do 2-mono desprotegido. Verificou-se também que o fator método foi significativo nas %área para todos os picos principais com exceção da Epi-1040, do 1040 e da minociclina. Este trabalho prático teve também como utilidade a perceção dos desafios futuros para a validação deste método de análise. Assim, caso seja possível a validação deste método na análise de pós de 1040 poder se-ão utilizar apenas o método de Omada IPC e o método de 1040 com as amostras diluídas em FMA de OMC IPC com 0,01% de TEA na análise destas amostras.

The purpose of this work consisted in checking wheter if it was possible to study an analytical method of OMC IPC (Omadacycline in-Process- samples of accompaniment of omadacycline syntesis) using FMA as a solvente in the analysis of powder samples of 1040. It was also made a comparison between the analytical methods of OMC IPC in which the samples were diluted in FMA (mobile phase A) and in water. In the case of 1040 method, it was also made a comparison between the original method of 1040 and the 1040 method in which it was added 0,01% of TEA (triethylamine) to the FMA for the analysis of 1040 powders in order to find out if the preservations conditions factor and the method factor were significant in the %pc (chromatographic purity) of the main peaks. Firstly, it were performed repeatability analysis of 1040 powder samples using the chromatograpic systems HPLC Waters Aquirity Arc and HPLC Waters Alliance in order to verify if it was possible to reproduce the OMC IPC method in this chromatograpic systems. It was concluded that it wasn´t possible to pre-validate the referred method due to the appearance of an unknown peak in the chromatogram obtained by HPLC Waters Alliance with the retention time of 3,71 minutes. This phenomenon was not observed in the chromatograpic system HPLC Waters Aquirity Arc. Before the comparison between the analytical methods mentioned previously it was concluded that the sample factor was significant concerning the areas percentages for every main peaks except 2-mono deprotected. It was also verified that the method factor was significant in the %area for every main peaks except Epi-1040, 1040 and minocycline. This practical work was also useful in the perception of future challenges to the validation of this method of analysis. Thus, in order to carry out a method validation for the anaysis of 1040 powder samples only the OMC IPC method and the 1040 method in which the samples are diluted in FMA of OMC IPC with 0,01% of TEA canbe used.