Quantificação de cell-free DNA presente no fluido folicular de mulheres submetidas a tratamentos de procriação medicamente assistida (PMA) e avaliação da relação com fatores de infertilidade e sucesso do tratamento

Abstract

A infertilidade conjugal é uma doença definida pela OMS como a ausência de gestação após 12 meses de relação sexual sem contracetivo. As tecnologias médicas de diagnóstico e tratamento, como a procriação medicamente assistida (PMA) permitem, atualmente, respostas para os casais que vivenciam o problema da infertilidade, porém as taxas de sucesso ainda são consideradas baixas. Na tentativa de aumentar essas taxas, vários estudos estão sendo feitos com o objetivo de identificar novas técnicas, como o estudo de novos biomarcadores não invasivos que possam prever o prognóstico de FIV e melhorar a gestão da infertilidade feminina. O cell-free DNA vem despertando bastante interesse como biomarcador não invasivos de diversas doenças, já sendo utilizado para o prognóstico de diversos tipos de cancro e complicações obstétricas, podendo ser detetados no sangue e em outros fluidos, sendo liberados de células necróticas e/ou apoptóticas. Sabendo da importância do fluido folicular (FF) para o crescimento e desenvolvimento do oócito, o cfDNA presente neste fluido tem sido visto como uma nova ferramenta para o desenvolvimento de biomarcadores. Neste estudo, além de padronizar o método para a quantificação, foi investigado se os níveis de cfDNA presente em amostras de FF de mulheres submetidas a tratamentos de procriação medicamente assistida (PMA), podem estar relacionados com os fatores de infertilidade, número de oócitos recuperados e resultados da fertilização in vitro (FIV). Assim, 106 amostras (n=106) de FF foram recolhidas de mulheres submetidas a fertilização in vitro (FIV e ICSI). O cfDNA foi quantificado por amplificação da sequência ALU, por qPCR. Foi possível observar que o nível de cfDNA foi significativamente mais elevado em amostras de FF de mulheres que não conseguiram engravidar após o tratamento de PMA quando comparado aos níveis de cfDNA presente no FF de mulheres que tiveram sucesso com o tratamento através do diagnóstico de gravidez clínica (OR 3.098; 95% CI 1.137-8.439; p=0,02) e (OR 3.350; 95% CI 1.149-9.196; p=0,02). Baseado nesses resultados podemos dizer o cfDNA pode constituir um promissor biomarcador para avaliar a qualidade do micro-ambiente folicular, podendo ser preditivo dos resultados da FIV, porém ainda se faz necessário uma otimização e padronização dos protocolos para a quantificação de cfDNA no fluido folicular bem como a realização de estudos mais amplos e aprofundados.

Infertility is a disease defined by WHO as the absence of pregnancy after 12 months of sexual intercourse without contraception. Medical technologies of diagnosis and treatment, such as medically assisted procreation (MAP) currently provide answers for couples experiencing infertility, but success rates are still considered low. In an attempt to increase these rates, several studies are being done with the aim of identifying new techniques, such as the insertion of new non-invasive biomarkers that can predict the prognosis of IVF and improve the management of female infertility. Cell-free DNA has been arousing much interest as a non-invasive biomarker of several diseases, already being used for the prognosis of several types of cancer and obstetric disorders, and can be detected in blood and other fluids, being released from necrotic and/or apoptotic cells. Knowing the importance of follicular fluid (FF) for oocyte growth and development, cfDNA present in this fluid is being seen as a new tool for biomarker development. In this study, in addition to standardizing the method for quantification, it was investigated whether the levels of cfDNA present in FF samples from women undergoing medically assisted procreation (MAP) treatments, may be related to infertility factors, number of recovered oocytes and IVF results. Therefore, 106 samples (n=106) of FF were collected from women undergoing in vitro fertilization (IVF and ICSI) and then cfDNA was quantified by amplification of ALU sequence, by qPCR. It was observed that the level of cfDNA was significantly higher in FF samples from women who failed to become pregnant after PMA treatment when compared to the levels of cfDNA present in FF from women who were successful with treatment through clinical pregnancy diagnosis (OR 3,098; 95% CI 1,137-8,439; p=0.02) and (OR 3,350; 95% CI 1,149-9,196; p=0.02). Based on these results, cfDNA may constitute a promising biomarker to evaluate the quality of the follicular microenvironment, thus predicting IVF results. However, it is still necessary to optimize and standardize protocols for the quantification of cfDNA in the follicular fluid, as well as to carry out broader and deeper studies.