Implementação de novas abordagens para o estudo da infertilidade

Abstract

A infertilidade afeta cerca de 15% dos casais em todo o mundo, sendo que destes, 20 a 30% dos casos tem origem unicamente masculina. A análise citomorfobioquímico do sémen é o teste que habitualmente se utiliza para avaliar a fertilidade masculina, contudo nem sempre deteta a causa da infertilidade. É assim importante que sejam avaliados outros parâmetros tais como o dano no ADN dos espermatozoides ou a presença de espécies reativas de oxigénio (ROS) no sémen. Efetuaram-se 52 análises citomorfobioquímicas do sémen e em 44 os parâmetros espermáticos foram normais. Após criopreservação do sémen destas 44 amostras, realizou-se o ensaio cometa e o ensaio de estrutura da cromatina do espermatozoide (SCSA) para analisar o dano nos espermatozoides, e o teste quimiluminescente para detetar a presença de ROS no sémen. Em 29 destas 44 amostras, foi possível efetuar, no sémen a fresco, o ensaio cometa. Uma vez que o estilo de vida influencia a qualidade espermática, foi igualmente material de análise o efeito do tabaco, da exposição a ambientes prejudiciais e a prática de exercício físico, na qualidade espermática. Para tal, cada participante (371) respondeu a um inquérito, anonimizado, em que se consideravam esses fatores. O dano no ADN, observado por ensaio cometa, com as amostras a fresco foi muito variável (de 11 UA a 372 UA) e nas amostras criopreservadas foi sempre superior ao dano presente nas amostras a fresco (de 266 UA a 390 UA). Com o teste SCSA os valores de dano obtido foram inferiores aos do ensaio cometa, na ordem de 50%. Observou-se que 15 das 44 amostras apresentavam elevadas concentrações de ROS. Relativamente à facilidade e utilidade de aplicação, a melhor técnica a utilizar para medir o dano no ADN é o ensaio cometa, pois ao contrário do teste SCSA não mede apenas quebras no ADN, e o teste quimiluminescente é uma técnica que avalia os ROS intra e extracelulares de modo eficaz, sendo ambas de fácil execução e baixo custo. Constatou-se ainda que o tabaco e a exposição ambiental influenciam negativamente a qualidade dos parâmetros espermáticos e que a prática de exercício físico parece ter uma influência positiva nos mesmos. Com este trabalho verificou-se que a análise do dano no ADN e a concentração de ROS no estudo da infertilidade é importante pois pode justificar algumas situações de infertilidade com parâmetros espermáticos normais. Concluiu-se, pela análise dos inquéritos, que o estilo de vida do homem pode ter influência na sua fertilidade.

Infertility affects around 15% of couples worldwide, and from these, males are found to be solely responsible for 20 to 30% of cases of infertility. Citomorphobiochemical semen analysis is the commonly used test for assessing male fertility, however, it does not always detect the cause of infertility. It is therefore important to study other parameters such as the sperm DNA damage or the presence of reactive oxygen species (ROS) in semen. Citomorphobiochemical semen analysis in 52 samples revealed that the sperm parameters were normal in 44 of them. After the semen cryopreservation of these 44 samples, the comet assay and the sperm chromatin structure assay (SCSA) were conducted to analyze the sperm DNA damage, and the chemiluminescent test to detect the presence of ROS in semen. In 29 of these 44 samples, it was possible to perform the comet assay in fresh semen. Since lifestyle influences sperm quality the effect of tobacco, exposure to harmful environments and physical exercise was also material of analysis in sperm quality. Therefore, each participant (371) responded to an anonymized survey, in which those factors were considered. The DNA damage observed by comet assay in fresh samples was very variable (from 11 AU to 372 AU) and the damage in cryopreserved samples was always greater than the damage present in the fresh samples (266 AU to 390 AU). With the SCSA test the obtained damage values were around 50% lower than the damage values obtained by comet assay. It was observed that 15 of the 44 samples had high levels of ROS. For ease and application utility the best technique to measure DNA damage is the comet assay because, unlike the SCSA test, it measures more than just breaks in DNA, and the chemiluminescent test is a technique that evaluates the intra and extracellular ROS effectively; both are inexpensive techniques and are easy to perform. It was also found that tobacco and environmental exposure negatively affect the sperm parameters quality and that physical exercise seems to have a positive influence on them. With this study we verified that the analysis of DNA damage and the concentration of ROS is of the upmost importance in the study of infertility, as it can justify some infertility situations in which the sperm parameters are normal. It was concluded by the analysis of the surveys, that man's lifestyle can have an impact on their fertility.