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https://hdl.handle.net/1822/34705
Título: | Understanding the role of KRAS-regulated autophagy in colorectal cancer: therapeutic implications |
Outro(s) título(s): | Caracterização do papel da autofagia regulada por KRAS no cancro colorretal: implicações terapêuticas |
Autor(es): | Francisco, Rita Alexandra Batista |
Orientador(es): | Preto, Ana Sousa, Maria João Alves, Sara Cristina Sequeira |
Data: | 2014 |
Resumo(s): | KRAS mutations (KRASMUT) are one of the most frequent genetic alterations present
in colorectal cancer (CRC). Recently, KRAS has been described to be involved in
autophagy, which is a cellular process whose role in cancer development still remains
controversial, being designated as a double-edged sword. Recent data showed that
CRC cells display high basal autophagic levels (a phenomenon denominated
“autophagy addition”), which seem to be a metabolic advantage. In fact, our group has
demonstrated that autophagy is important for CRC cells survival and that this catabolic
process is regulated by KRASMUT in the colon model. Besides being an autophagy
modulator, KRASMUT is also a molecular biomarker of resistance anti-EGFR inhibitors
therapy.
This project general aim was to better understand how KRAS regulates autophagy
in the colon model and how this impacts CRC therapeutic approaches. Specifically, we
determined if upon autophagy induction by starvation the levels of KRAS changed and
whether KRAS altered its localization in response to this stimulus. Furthermore, we
explored the potential clinical impact of KRAS or autophagy inhibition in CRC. For these
purposes, we used different cell lines: two CRC cell lines harbouring different KRASMUT
and a non-cancer colon model stably expressing KRASWT and three hotspot mutations
(KRASG12D, KRASG13D and KRASG12V). Additionally, in order to achieve our goals several
molecular biology techniques were performed, including western blot analysis, SRB
and immunofluorescence assays and RNA interference technique.
Our data reinforced our understanding of the crucial role of KRAS and
autophagy in CRC carcinogenesis and suggested the use of KRAS and autophagy as
effective targets for the development of more efficient CRC therapeutic strategies. Mutações que afetam o KRAS (KRASMUT) são uma das mais frequentes alterações genéticas presentes no cancro colorretal (CCR). Recentemente, o KRAS foi descrito como estando envolvido na autofagia, um processo celular cujo papel no desenvolvimento no cancro permanece ainda controverso, sendo considerado uma “faca de dois gumes”. Contudo, dados bastante recentes mostram que linhas celulares derivadas de CCR exibem elevados níveis basais de autofagia (um fenómeno denominado "adição autofágica"), o que parece constituir vantagem metabólica. Na verdade, o nosso grupo demonstrou que a autofagia é importante para a sobrevivência celular e que este processo catabólico é regulado pelo KRASMUT no modelo do cólon. Além de ser um modulador de autofagia, o KRASMUT é também um biomarcador molecular de resistência à terapia de inibidores anti-EGFR. O objetivo geral do projeto foi compreender melhor como o KRAS regula a autofagia no modelo de cólon e qual poderá ser o impacto dessa regulação nas abordagens terapêuticas do CCR. Especificamente, determinámos se após a indução de autofagia por restrição de nutrientes os níveis de KRAS se alteravam e se esta proteína modificava a sua localização em resposta a este estímulo. Além disso, explorámos o potencial impacto clínico da inibição do KRAS ou da autofagia na terapia CCR. Para tal, utilizámos três modelos diferentes: duas linhas celulares de CCR com duas KRASMUT diferentes e um modelo de cólon não cancerígeno que expressa estavelmente KRASWT e três mutações “hotspot” (KRASG12D, KRASG13D e KRASG12V) deste oncogene. Adicionalmente, de modo a atingirmos os nossos objectivos, várias técnicas de biologia molecular foram desenvolvidas, incluindo análise de níveis de expressão proteica por western blot, ensaios de SRB e imunofluorescência e a técnica de RNAi, entre outras. Os nossos resultados reforçam o papel crucial do KRAS e da autofagia na carcinogénese do CCR e, consequentemente identifica-os como alvos importantes e eficazes para o desenvolvimento de estratégias terapêuticas mais eficientes. |
Tipo: | Dissertação de mestrado |
Descrição: | Dissertação de mestrado em Molecular Genetics |
URI: | https://hdl.handle.net/1822/34705 |
Acesso: | Acesso aberto |
Aparece nas coleções: | BUM - Dissertações de Mestrado DBio - Dissertações de Mestrado/Master Theses |
Ficheiros deste registo:
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