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https://hdl.handle.net/1822/35692
Título: | Development of new DODAX:MO:DC-Chol nanoparticles containing BRAF-siRNA for colorectal cancer therapy |
Autor(es): | Nogueira, Sara Emanuela Silva |
Orientador(es): | Preto, Ana Gomes, Andreia Oliveira, M. Elisabete |
Data: | 2015 |
Resumo(s): | Colorectal cancer (CRC) is a leading cause of cancer related mortality in the Western
World. Preto A and collaborators demonstrated that BRAF is crucial for proliferation and
survival of microsatellite instability (MSI) CRC with BRAFV600E but not of MSI CRC
harboring KRAS mutations. This provides evidence supporting BRAF as a good target for
therapeutic intervention in patients with sporadic MSI CRC harboring activating
mutations in BRAF.
Gene therapy through siRNAs has been established as a new therapeutic alternative
approach. Cationic liposomes have been extensively used among the nonviral methods
used for gene delivery, being MO-based liposomes established as efficiently delivery
systems for siRNAs. The aim of this thesis was to develop and characterize a novel
DODAX:MO:DC-Chol based system for specific delivery of BRAF-siRNA in CRC cells for
intravenous or local administration.
Our results demonstrated that all MO-based liposomal formulations were able to
efficiently encapsulate si‘NA. We could obtain stable lipoplexes of small size (100-160 nm) with a positive surface charge (>38 mV). We showed that DODAC-based liposomes
exhibited higher fusogenic ability but more cytotoxicity in the CRC derived cell line RKO.
Post-pegylation of the liposomes and lipoplexes decreased efficiently the surface charge
of liposomes, and post-pegylated liposomes revealed a better internalization in RKO
cells compared with non-pegylated ones. All MO-based liposomes showed low
hemolysis, which is suitable for an intravenous injection. The analysis of the transfection
efficiency and BRAF silencing of the lipoplexes DODAB:MO:DC-Chol containing BRAFsiRNA
in RKO CRC cells, was not conclusive. Although further studies are needed, our
preliminary results suggest that DODAB:MO:DC-Chol-BRAF-siRNA nanocarriers might be
efficient in silencing BRAF expression in CRC cells.
In conclusion, the DODAB:MO:DC-Chol lipoplexes developed in this work might be
promising nanovectors for siRNA delivery as a therapeutic approach for gene silencing
in CRC. O cancro colo-retal (CCR) é a principal causa de morte, por cancro, no mundo ocidental. Preto A e colaboradores, demonstraram que o BRAF é crucial para a proliferação e sobrevivência dos CCRs com instabilidadade de microssatelites (MSI) com BRAFV600E, mas não para os CCRs MSI com mutações do KRAS. Este facto fornece evidências que suportam o BRAF como um bom alvo para intervenção terapêutica em pacientes com CCR MSI esporádico com mutações do BRAF. A terapia genética através de siRNAs tem sido estabelecida como uma nova abordagem terapêutica alternativa. Os lipossomas catiónicos têm sido extensivamente usados entre os métodos não virais para a entrega de genes, sendo os lipossomas baseados em MO estabelecidos como eficiêntes sistemas de entrega de siRNAs. O objetivo desta tese foi desenvolver e caracterizar sistemas DODAX:MO:DC-Chol para entrega específica de BRAF-siRNA em células de CRC para administração intravenosa ou local. Os nossos resultados mostraram que todas as formulações de lipossomas baseadas em MO foram capazes de encapsular eficientemente siRNA. Obtivemos lipoplexos estáveis com pequenas dimensões (100-160 nm), com carga de superfície positiva (> 38 mV). Nós mostramos que os lipossomas baseados em DODAC exibiram maior capacidade fusogénica mas mais citotoxicidade na linha celular RKO derivada do CCR. A pós-pegilação dos lipossomas e lipoplexos diminuiu de forma eficiente a carga da superfície dos lipossomas, e os lipossomas pós-peguilados revelaram uma melhor internalização quando comparados com os não-peguilados, em células RKO. Todos os lipossomas contendo MO demonstraram uma baixa hemólise, o que é adequado para uma injecção intravenosa. A análise da eficiência de transfecção e do silenciamento do BRAF pelos lipoplexos DODAB:MO:DC-Chol contendo BRAF-siRNA nas células RKO de CCR, não foi conclusiva. Apesar de serem precisos outros testes, os nossos resultados preliminares, sugerem que os lipoplexos de DODAB:MO:DC-Chol-BRAF-siRNA poderão ser eficientes no silenciamento da expressão do BRAF em células de CCR. Em conclusão, os lipoplexos DODAB:MO:DC-Chol desenvolvidos neste trabalho poderão ser nanovectores promissores para entrega de siRNA, como uma abordagem terapêutica para o silenciamento de genes no CCR. |
Tipo: | Dissertação de mestrado |
Descrição: | Dissertação de mestrado em Biophysics and Bionanosystems |
URI: | https://hdl.handle.net/1822/35692 |
Acesso: | Acesso aberto |
Aparece nas coleções: | BUM - Dissertações de Mestrado |
Ficheiros deste registo:
Ficheiro | Descrição | Tamanho | Formato | |
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