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https://hdl.handle.net/1822/10808
Título: | Depleção do DNA mitocondrial: estudo de 14 doentes |
Autor(es): | Esteves, Ana Sofia Teixeira |
Orientador(es): | Vilarinho, Laura Lucas, Cândida |
Data: | 29-Jan-2010 |
Resumo(s): | Nos últimos 30 anos, um largo espectro de doenças multissistémicas
associadas a disfunções da mitocôndria, designando-se globalmente de
citopatias mitocondriais, têm sido referenciadas, com sintomatologia desde o
período neonatal até à idade adulta. Estas disfunções podem afectar qualquer
órgão ou tecido do organismo, embora os músculos esquelético e cardíaco e o
Sistema Nervoso Central (SNC) sejam os mais afectados, devido à sua elevada
dependência do metabolismo energético.
O Síndrome de Depleção Mitocondrial (MDS) é um grupo clinicamente
heterogéneo de doenças mitocondriais caracterizado por uma redução parcial ou
total do número de cópias do DNA mitocondrial (mtDNA) nos tecidos afectados.
O seu mecanismo patogénico está relacionado com a manutenção do pool de
nucleótidos mitocondriais, que assume um papel crucial na replicação e
integridade do mtDNA. São conhecidas três formas clínicas de MDS: miopática,
hepatocerebral e encefalomiopática.
O principal objectivo deste estudo, foi a implementação das técnicas de
Southern blot e PCR quantitativo em tempo real (qtRT-PCR), para o estudo da
depleção do mtDNA, bem como o estudo molecular dos genes DGUOK e TK2, por
sequenciação automática. Estes codificam enzimas mitocondriais envolvidas na
síntese de mtDNA via suplemento de deoxiribonucleotídios (dNTPs). A escolha
destes genes baseou-se no grande número de mutações já descritas, associadas
ao MDS.
Foram estudados 14 doentes clinicamente suspeitos de MDS, tendo sido
identificada uma mutação patogénica em heterozigotia no gene DGUOK, já
descrita na literatura, num dos doentes deste estudo. Foi ainda possível
identificar vários polimorfismos nos dois genes estudados, sendo que dois deles
não estão descritos na literatura.
A optimização das técnicas utilizadas, permitiu concluir que o qtRT-PCR, é
uma técnica mais rápida, sensível e específica que o Southern blot, podendo ser
vantajosa para um melhor e mais preciso diagnóstico da depleção do mtDNA. In the last 30 years, a large spectrum of multisystemic disorders associated with mitochondrial dysfunction, have been described, with symptoms since neonatal period to late adult life. Although tissues with a high demand for oxidative phosphorilation such as brain and skeletal muscle are frequently affected, virtually any tissue can be involved. Because of that, multisystemic mitochondrial diseases are often referred to as mitochondrial encephalomyopathies, or in a larger concept, as mitochondrial cytophaties. The Mitochondrial Depletion Syndrome (MDS) is a clinically heterogeneous group of mitochondrial diseases characterized by a reduced number of copies of mitochondrial DNA (mtDNA) in the affected tissues. Its pathogenic mechanism is related with mitochondrial nucleotide pool maintenance, which plays a crucial role in mtDNA replication and integrity. Three clinical forms of MDS are known: myopathic, hepatocerebral and encephalomyopathic. The aim of this study was the implementation of Southern blot and Quantitative Real Time PCR (qtRT-PCR) techniques for the study of mtDNA reduction, beyond the molecular study of DGUOK and TK2, through automatic sequencing. These two genes, encode mitochondrial kinases, involved in mtDNA synthesis by supplement of deoxiribonucleotides (dNTPs). These genes were chosen because of large number of mutations already described, associated with MDS We studied 14 patients clinically suspected of having MDS. One pathogenic mutation in heterozigoty in DGUOK gene already described in literature was identified. It was also possible to identify several polymorphisms in the two genes studied, two of which for the first time. The optimization of the techniques used allowed us to conclude that qtRT-PCR is a more sensitive, fast and specific technique than Southern blot, and thus more appropriate for a better and more accurate diagnosis of mtDNA depletion. |
Tipo: | Dissertação de mestrado |
Descrição: | Dissertação de mestrado em Genética Molecular |
URI: | https://hdl.handle.net/1822/10808 |
Acesso: | Acesso aberto |
Aparece nas coleções: | BUM - Dissertações de Mestrado DBio - Dissertações de Mestrado/Master Theses |