Estudo molecular das mutações no gene PIGA em doente com hemoglobinúria paroxística noctura

Abstract

A Hemoglobinúria Paroxística Nocturna é uma doença rara, que afecta ambos os sexos em qualquer idade. Muito cedo foi descoberto que esta doença é uma doença de origem adquirida, que leva ao aparecimento de clones de células hematopoiéticas com deficiência nas proteínas com ligação a âncoras GPI. A deficiência destas proteínas é devida à produção alterada, ou mesmo deficiência total das âncoras GPI, que por sua vez, se deve ao aparecimento de mutações numa proteínas da via de síntese das âncoras GPI – PIGA. Assim, neste trabalho amplificou-se o promotor e a sequência codificante do gene PIGA para a identificação e caracterização das mutações presentes em doentes com Hemoglobinúria Paroxística Nocturna, ou de doentes com sintomas que levam à suspeita de Hemoglobinúria Paroxística Nocturna. Dos doentes estudados só foi possível identificar a mutação num dos doentes. Esta mutação leva o aparecimento de um frameshit levando à formação de uma proteína truncada logo no segundo exão da proteína PIG-A (Thr192fX7). Para o resto dos doentes não foi possível identificar mutações que fossem possivelmente causadoras da doença, não sendo de excluir completamente a possibilidade de haver alterações não detectáveis por sequenciação. É importante descrever também, que foi encontrado com muita frequência um possível polimorfismo (-342C→G) na zona do promotor do gene PIGA, cuja frequência deverá ser estudada com mais rigor numa população maior, tanto de doentes como de indivíduos normais.

Paroxistic Nocturnal Haemoglobinuria is a rare disease, which can affect both sexes in any age. It was soon discovered that this is a clonal disease that involves the haematopoietic lineage and leads to the deficiency of proteins that connect to the cells by GPI anchors. This deficiency is caused by the lack or deficient production of the anchors themselves, and is due to mutations in a protein that participates in the biosynthesis of the GPI anchors - PIG-A. In this work, it was studied the promoter and the coding region of the PIGA gene, to the identification and characterization of the mutations present in patients with Paroxistic Nocturnal Haemoglobinuria, or with clinical suspicion of having Paroxistic Nocturnal Haemoglobinuria. From the patients studied, it was identified a frameshift mutation in exon two, that leads to a truncated protein (Thr192fX7). In the rest of the patients, we couldn’t find any other disease causing mutation, even though we can’t exclude completely the possibility of a mutation that can’t be detected by sequencing. We found however, a possible polymorphism (-342C→G), in the PIGA promoter in many patients, both affected or non- affected by Paroxistic Nocturnal Haemoglobinuria. The frequency of this polymorphism should be determined in a larger population.