Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/1822/2388

TitlePesquisa de genes envolvidos no transporte de glicerol em Saccharomyces cerevisiae
Author(s)Oliveira, Rui Pedro Soares de
Lucas, Cândida
KeywordsTransporte de glicerol
Saccharomyces cerevisiae
Issue date1997
Abstract(s)S. cerevisiae acumula, em condições de stress osmótico, glicerol como soluto compatível, tendo-se verificado que a sua retenção está dependente, nestas condições ambientais, de um canal proteico codificado pelo gene FPS1(1). Por seu lado, recentemente, foi descrito para glicerol um transporte activo do tipo simporte com H+/glicerol, com carácter indutivo, detectável após crescimento em condições gluconeogénicas e presente também no mutante interrompido fps1(1,2). A estratégia usada no presente trabalho consistiu na utilização de uma estirpe de S. cerevisiae mutante nos genes GPD1 e GPD2, que codificam para as isoenzimas da glicerol-3P-desidrogenase como receptora de uma biblioteca genómica da mesma espécie, seguida de selecção fenotípica em meios de stress osmótico elevado na presença de algum glicerol exógeno. Para isso, elaborou-se um rastreio fenotípico de resistência a NaCl, sorbitol e sacarose, tendo sido seleccionados 30 clones que foram posteriormente submetidos a um rastreio fisiológico específico para o transporte de glicerol. Este consistiu em ensaios sobre (i) presença de alcalinização extracelular após adição de glicerol, (ii) capacidade de acumulação de glicerol contra gradiente e (iii) determinação das constantes cinéticas do transporte. Todos os ensaios foram repetidos em células cultivadas em glucose e em etanol para obviar à falta de detacção devida a inactivação do transportador pela glucose, tal como foi observado na estirpe selvagem(2). Com esta metodologia foram seleccionados 5 clones sobre os quais se procede neste momento a estudos moleculares. (1) Sutherland, F.; Lages, F.; Lucas, C.; Luyten, K.; Albertyn, K.; Hohmann, S.; Prior, B. and Kilian, S. (Submetido) (2) Lages, F. and Lucas, C. Biochim. Biophys. Acta(1997) (in press)
TypeOral presentation
DescriptionComunicação apresentada no "Congresso Nacional de Microbiologia - Micro'97", realizado em Tomar, Portugal, de 29 de Novembro a 1 de Dezembro de 1997.
URIhttp://hdl.handle.net/1822/2388
Peer-Reviewedyes
AccessOpen access
Appears in Collections:DBio - Comunicações/Communications in Congresses

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